引言：呼吸道病原体六重核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）在我国属于第三类体外诊断试剂产品，产品用于定性检测人咽拭子样本中的呼吸道病原体，包括甲型流 感病毒（季节性 H1N1、新型甲型 H1N1 流感病毒（2009）、H3N2、H5N1、 H7N9）、乙型流感病毒（Victoria 系和 Yamagata 系）、腺病毒（B 组、 C 组、E 组）、呼吸道合胞病毒（A 亚型和 B 亚型）、肺炎支原体和百 日咳鲍特菌。本文为大家带来呼吸道病原体六重核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）临床试验设计实例，一起看正文。

一、呼吸道病原体六重核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）主要原材料 

本产品在制备过程中主要原材料包括 Carrier RNA、磁珠、引物、 探针、扩增反应液、含 FluA、B 假病毒、RSV 假病毒，AdV 假病毒、 M.P 质粒、B.P 质粒和 HEK293 细胞的混合液。其中 Carrier RNA、磁 珠、引物、探针、扩增反应液、FluA、B 假病毒、RSV 假病毒，AdV 假病毒、M.P 质粒、B.P 质粒为外购，HEK293 细胞为申请人自行生产。 申请人对主要原材料进行了供应商的选择，通过功能性试验，筛 选出合格供应商，制定了各主要原材料的质量标准并经检验合格。 企业参考品和质控品的设置情况 本产品企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、检测限参考品 和精密度参考品。参考品均采用病原体培养物制备而成。组成如下： 阳性参考品：20 份，由试剂盒检测位点各个基因型别的病原体培 养物组成。 阴性参考品：10 份，由试剂盒检测范围外的病原体培养物组成。 精密度参考品：3 份，由中强阳性、弱阳性和阴性浓度水平的病 原体培养物组成。 检测限参考品：20 份，由包含试剂盒检测位点各个基因型别的最 低检测限浓度水平的病原体培养物组成

二、呼吸道病原体六重核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）稳定性研究 

申请人对本产品的效期稳定性、冻融稳定性、运输稳定性以及样 本稳定性进行研究，确定了在各种条件下本产品及样本的有效保存时 间。 效期稳定性：使用企业参考品对三批试剂按照技术要求检测，分 别于试剂盒保存的第 0 个月、6 个月、10 个月、12 个月、15 个月进行 稳定性试验；检测结果均符合技术要求。因此，试剂盒按照说明书要 求可保存 12 个月，检测性能稳定。

三、呼吸道病原体六重核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）临床试验设计实例

申请人在首都儿科研究所附属儿童医院、广州医科大学附属第三 医院和济南市儿童医院共 3 家机构完成了临床试验。

入组人群为呼吸 道感染的患者，样本类型为咽拭子。 

针对甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原体核酸检测，临床试验采用试验体外诊断试剂与已上市同类产品进行比对，入组病例 2150 例。 针对甲型流感病毒，纳入阳性病例 263 例，阴性病例 1887 例。试验结果显示，阳性符合率为 98.1%（95CI：95.6%，99.2%），阴性符 合率为 99.3%（95CI：98.8%，99.6%）； 针对乙型流感病毒，纳入阳性病例 212 例，阴性病例 1938 例。试验结果显示，阳性符合率为 100%（95CI：98.2%，100%），阴性符合 率为 99.5%（95CI：99.1%，99.8%）； 针对腺病毒，纳入阳性病例 277 例，阴性病例 1873 例。试验结果显示，阳性符合率为 96.4%（95CI：93.5%，98.0%），阴性符合率为 99.7%（95CI：99.4%，99.9%）； 针对呼吸道合胞病毒，纳入阳性病例 224 例，阴性病例 1926 例。 试验结果显示，阳性符合率为 99.6%（95CI：97.5%，99.9%），阴性 符合率为 99.2%（95CI：98.7%，99.5%）； 针对肺炎支原体，纳入阳性病例 251 例，阴性病例 1899 例。试验 结果显示，阳性符合率为 98.8%（95CI：96.5%，99.6%），阴性符合率为 99.3%（95CI：98.8%，99.6%）。针对百日咳鲍特菌核酸检测，临床试验采用试验体外诊断试剂与 Sanger 测序进行比较研究，共入组 2150 例病例，包括阳性病例 352 例，阴性病例 1798 例。试验结果显示，阳性符合率为 99.7%（95CI： 98.4%，99.9%），阴性符合率为 99.8%（95CI：99.5%，99.9%）。同 时还进行了与百日咳鲍特菌培养鉴定的比较，包括培养阳性病例 85 例，培养阴性病例 810 例。灵敏度为 98.8%（95CI：93.6%，99.8%），特异度为 70.1%（95CI：66.9%，73.2%）。针对与培养鉴定不一致的 样本，均结合 Sanger 测序进行了确认。

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